aCGT异体脐带间充质干细胞静脉注射液治疗失代偿期乙肝肝硬化
aCGT Allogeneic Human Umbilical-cord Mesenchymal Stem Cell (hUC-MSC) Intravenous Injection forDecompensated HBV-related Liver Cirrhosis
1. 作用机理 Mechanism of Action
失代偿期乙型肝炎肝硬化是指乙肝病毒诱导的在肝脏内代谢过程中因各种机制引起不同程度的肝损伤，最终形成的肝硬化。早期肝功能尚可代偿，肝硬化发展到一定程度，超出肝功能的代偿能力，称为肝硬化失代偿期。主要临床表现为肝功能减退和门静脉高压所致的症状和体征，患者常因并发腹水、原发性腹膜炎、消化道出血、肝性脑病、肝肾综合征及脓毒症等导致多脏器功能衰竭而死亡[1,2]。
间充质干细胞治疗作用机理总结为以下几点[3,4]：①调节抗炎反应和调控多种免疫细胞：包括调控巨噬细胞极化方向、调节B细胞和T细胞分化和调节树突状细胞等抗原呈递细胞的功能等；②MSCs可以通过分泌IL-10和TNF-α抑制肝星状细胞的活性，或通过Fas/FasL途径促进星状细胞的凋亡，从而抑制肝纤维化的形成；③旁分泌因子及其他治疗机制：包括抑制肝脏组织的炎症微环境、MSCs分泌HGF等参与抗凋亡途径维持肝细胞存活、分泌VEGF增强血管生成和肝组织再生等，从而促进肝细胞再生并抑制细胞凋亡。
间充质干细胞治疗肝硬化的潜在机制[5]
参考文献：
[1]李云静. 阿德福韦酯联合拉米夫定治疗乙肝肝硬化失代偿期的疗效及安全性评价[J]. 实用药物与临床, 2012, 15(12):3.
[2]盛国光, 朱清静, 徐建良,等. 肝炎肝硬化失代偿期患者中医证型临床特点分析[J]. 中西医结合肝病杂志, 2007, 17(1):3.
[3]Parekkadan B ,Poll D V ,Megeed Z , et al. Immunomodulation of activated hepatic stellate cells by mesenchymal stem cells[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2007, 363(2):247-252.
[4] Selma Maacha, Heba Sidahmed, Shana Jacob, Giusy Gentilcore, Rita Calzone, Jean-Charles Grivel, Chiara Cugno, "Paracrine Mechanisms of Mesenchymal Stromal Cells in Angiogenesis", Stem Cells International, vol. 2020
[5] Eom Y W et al. Mesenchymal stem cell therapy for cirrhosis: Present and future perspectives. World Journal of Gastroenterology. 2015 Sep 28;21(36):10253-61
2. 未满足临床需求 Unmet Clinical Needs
（1）流行病学:
根据全球疾病负担报告，2017年全球因肝硬化死亡的患者为132万例，占全球全因死亡的2.4%。我国2015年因肝硬化死亡患者约为16.1万例，据2018年统计我国肝硬化死亡率为4.77/10万人[1]。1990年-2016年，我国肝硬化和慢性肝病患病人数从近700万人升高到近1200万，全年龄组患病率升高了44%（由601.5/10万升高到868.3/10万），而年龄标准化患病率下降了5.8%（由744.6/10万下降到701.7/10万）；男性的患病率、死亡率及标准化患病率、死亡率均高于女性。在亚太地区，导致肝硬化的主要病因是HBV(51.3%)[1]。我国肝硬化患者中，由HBV所致者为77%[2]。我国约有9300万慢性HBV感染者，其中慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB）患者约2000万，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌。ｅ抗原（hepatitis B e antigen, HBeAg）阳性和HBeAg阴性的CHB患者，５年内肝硬化发生率分别为8%-17%和13%-38%。肝硬化失代偿期的５年内累积发生率约为20%，失代偿期肝硬化患者的5年存活率仅为14%-35%。
（2）目前治疗手段:
目前尚无根治肝硬化的方法，因此对于肝硬化的治疗，始终以早发现、早治疗为主。当前针对肝硬化的治疗主要根据不同病因采取不同的对因治疗方式。乙肝肝硬化治疗的主要目标是最大限度地长期抑制HBV复制，如使用抗病毒药物恩替卡韦、富马酸替诺福韦酯、富马酸丙酚替诺福韦片、干扰素-α等，减轻肝细胞炎症坏死及肝脏纤维组织增生，延缓和减少肝功能衰竭、肝硬化失代偿、肝细胞癌和其他并发症的发生。此外还有抗炎、抗氧化、保肝（如甘草酸制剂、水飞蓟素制剂、多不饱和卵磷脂制剂和双环醇等）、抗纤维化（如安络化纤丸、复方鳖甲软肝片、扶正化瘀片）、调节免疫等治疗。上述手段的治疗局限是大多为对因或对症治疗，无法显著地逆转患者现有的肝纤维化进程，且无法显著提高患者生存率和改善生活质量[3,4]。
目前，肝移植仍然是治疗失代偿期肝硬化最有效的手段，但由于供体肝脏来源缺乏，只有少数患者能得到移植治疗，远不能满足失代偿期肝硬化治疗的临床需求。
（3）本产品的治疗优势：
多项研究表明，间充质干细胞移植是人类自身免疫性疾病等的理想细胞治疗选择，其安全性和有效性已通过多项研究得到证实，如系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）、多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）等[5-7]。
间充质干细胞治疗肝硬化的临床研究也相当之多，广泛认可的治疗机制包括以下几个方面：1）通过调节抗炎反应和调控多种免疫细胞，途径包括：①调控巨噬细胞极化反应方向，使其由促炎的M1型转变为抑炎的M2型；②抑制Th1细胞和Th17细胞分化，减少IFN-γ和IL-17分泌、促进IL-10分泌，从而诱导调节性Ｔ细胞的产生，使CD4+T淋巴细胞转化为抗炎状态并发挥治疗作用[8]；③减少单核细胞分化为DC细胞，影响CD1a、CD40、CD80、CD86和HLA-DR的上调。2）MSC可抑制肝脏组织的纤维化反应，通过分泌IL-10和TNF-α抑制肝星状细胞的活性，或通过Fas/FasL途径促进星状细胞的凋亡，从而抑制肝纤维化的形成[9]。3）通过旁分泌因子HGF、IGF-1、EGF、NGF、VEGF等，抑制肝脏组织的炎症微环境和参与抗凋亡途径，促进肝脏组织血管再生和肝组织再生。
现有治疗手段，虽然可以部分改善患者的临床症状及延缓疾病的进展，但无法完全逆转患者的肝脏功能减退。因此，亟需寻找一种新的有效的治疗方式，而多项临床研究表明，干细胞治疗或许是一项选择。
参考文献：
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[3]杨彩英. 肝硬化临床治疗方法[J]. 世界最新医学信息文摘, 2019(47):1.
[4]中华医学会医学工程学分会干细胞工程专业学组, 韩英, 郭长存,等. 干细胞移植规范化治疗肝硬化失代偿的专家共识(2021)[J]. 中华细胞与干细胞杂志：电子版, 2021, 11(2):10.
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[6]Wong, R.S., Role of stem cells in spondyloarthritis: Pathogenesis, treatment and complications. Hum Immunol, 2015. 76(10): p. 781-8.
[7]Krajewska-Włodarczyk M, O.-S.A., Placek W, et al., Role of stem cells in pathophysiology and therapy of spondyloarthropathies—new therapeutic possibilities. International journal of molecular sciences, 2018. 19(1):: p. 80.
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[9]Haddad R, Saldanha-Araujo F. Mechanisms of T-Cell Immunosuppression by Mesenchymal Stromal Cells: What Do We Know So Far? [J]. Biomed Research International, 2014, 2014:216806.
3. 全球同产品对比情况 Comparison of Similar Products Worldwide
经查询美国临床试验注册网clincaltrials.gov和中国临床试验注册中心网站，同类产品（UC-MSC）临床研究数据显示：应用间充质干细胞治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的相关研究有34项。代表性的临床研究包括如：解放军总医院第五医学中心国家感染性疾病诊疗与研究中心王福生院士团队开展了一项评价脐带间充质干细胞静脉输注治疗失代偿期乙肝肝硬化患者长期疗效的临床研究（NCT01220492）[1]；河南省人民医院消化内科开展了一项脐带间充质干细胞静脉输注治疗慢乙肝肝硬化的临床研究[2]；河北医科大学第一医院中西医结合肝病诊疗中心开展了一项比较经外周静脉移植脐血干细胞与脐带间充质干细胞治疗乙型肝炎肝硬化患者的临床疗效[3]；山东医学高等专科学校附属医院开展了一项随访6个月的脐带间充质干细胞治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化的临床研究[4]；解放军南京军区福州总医院肝胆内科开展了一项脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的1年随访对照研究[5]；解放军第八五医院南京军区上海临床肝病研究中心开展了一项探索人脐带间充质干细胞剂量递增外周静脉输注治疗失代偿性肝硬化的安全性和耐受性临床研究[6].
整体临床研究结果显示，接受MSC单次或多次给药后，实验室检查方面，大多数患者肝功能各项指标及凝血功能基本趋于正常，血清白蛋白水平明显上升，血清IL-10、TGF-β水平明显升高，T4细胞和Treg细胞明显上升；疾病评分方面，患者接受移植后MELD、Child-Pugh评分有很大改善；临床症状和体征方面，患者食欲、精神、体力都明显好转，腹胀、少尿、水肿等症状明显减轻，因腹水、消化道出血、肝性脑病住院次数减少，患者生活质量有显著提高。
参考文献：
[1] Ming Shi，Yuan‑Yuan Li，Ruo‑Nan Xu，Fu‑Sheng Wang，et al. Mesenchymal stem cell therapy in decompensated liver cirrhosis:a long‑term follow‑up analysis of the randomized controlled clinicaltrial. Hepatology International (2021) 15:1431–1441.
[2]江小柯，李修岭等，脐带间充质干细胞治疗慢乙肝肝硬化长期疗效分析，医药论坛杂志2018年2月第39卷第2期.
[3]张岁，柳立平等，脐血干细胞与脐带间充质干细胞移植治疗乙型肝炎肝硬化的疗效比较，河北医药2017年8月第39卷第16期.
[4] 薛超，马文娜等，脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化12例临床疗效观察，肝脏2020年１月第２５卷第１期.
[5] 曾芝雨，李东良等，脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化：1年随访对照，中国组织工程研究第19卷第10期.
[6] 傅青春等，人脐带间充质干细胞剂量递增静脉输注治疗失代偿性肝硬化的安全性研究，肝脏2014年1月第19卷第１期.
4. aCGT药学CMC研发 aCGT Pharmaceutical CMC R&D
aCGT细胞库：已完成细胞库(种子库、主库、工作库)建立的工艺开发、细胞库质量分析方法的开发和验证，形成了细胞库的质量标准，并建立多个符合质量标准且可用于人脐带间充质干细胞注射液中试生产的细胞库。同时，持续进行细胞库运输稳定性、存储稳定性等研究，目前存储稳定性研究已开展至60个月，显示稳定性良好。
aCGT中试生产：已完成人脐带间充质干细胞注射液中试生产的工艺开发、分析方法开发和验证，形成了以“淋巴细胞增殖抑制检测、淋巴细胞分泌TNF-α抑制、淋巴细胞分泌IL-17A抑制和IDO1活性检测”等生物学功能检测为代表的注射液质量标准；完成多批次注射液中试生产，代表批次由中国食品药品检定研究院出具质量符合合格证书。同时，中试生产批次用于运输稳定性、使用稳定性及存储稳定性等持续性研究中，目前存储稳定性研究已开展至48个月，显示稳定性良好。
aCGT临床试验IND申报：上述扎实的药学CMC研究，已支持aCGT人脐带间充质干细胞注射液用于治疗呼吸窘迫综合征（ARDS）、强直性脊柱炎（AS）、烧伤、失代偿期乙肝病毒肝硬化和慢性阻塞性肺疾病等适应证的临床试验申报，并均获得中国药监局临床默示许可IND。其中，aCGT人脐带间充质干细胞注射液治疗强直性脊柱炎（AS）以获得美国FDA的pre-IND meeting积极性回复函。
aCGT人脐带间充质干细胞注射液用于治疗更多适应症预计于2026-2027年申请获批IND。
同时，aCGT目前正在进行封闭式的全自动反应器体系工艺的开发和优化，有望在保证细胞质量的前提下，实现更低成本更大产量的工艺升级。
5. 非临床研究 Non-clinical R&D
aCGT按照治疗用生物制品1类新药申报要求完成了药理学、药代动力学和毒理学评价研究。
aCGT委托具专业资质的CRO公司上海益诺思生物技术股份有限公司完成了非临床安全评价动物实验。相关实验报告另见。
药理学部分:药效学结果显示，人脐带间充质干细胞注射液对CCl4联合橄榄油腹腔肝硬化大鼠模型具有很好的治疗效果，通过抗炎调节大鼠体内免疫平衡，抑制肝硬化大鼠肝脏纤维化，从而整体提高肝硬化大鼠的生存率(由40%提高到93.3%)。次要药效学结果显示MSCs对PHA激活的PBMC分泌TNF-α、IL-17A有显著抑制作用；MSCs对PHA激活的PBMC分泌IL-6有显著促进作用（p≤0.05）. MSCs对PHA激活的PBMC中T细胞亚群Th1和Th17细胞的活化和增殖有显著抑制效果（p≤0.05）；MSCs对PBMC中Treg细胞的活化和增殖有显著促进效果（p≤0.05）。MSCs对PHA激活的PBMC增殖有显著的抑制作用（p≤0.05）。安全药理学结果显示人间充质干细胞注射液输注对动物中枢神经系统和血管系统和呼吸系统无明显影响。
药代动力学部分:体内分别实验结果显示静脉注射本品人脐带间充质干细胞注射液后主要分布于肺部和肝脏。
毒理学部分:毒性实验结果显示人脐带间充质干细胞最大安全剂量为10×107cells /kg。体内外成瘤性和致瘤性实验结果表明人脐带干细胞注射液无致癌性风险。
6. 生产能力 Production Capacity
aCGT目前委托生产的设施包括：①位于上海的CRO泉生公司自有约1000平米C级洁净和约1500平米B级洁净细胞制剂制备车间和质控实验室；②正在装修建设中的、位于中国浙江安吉的、CRO泉生公司自有的近30000平米含各洁净级别和设施的细胞制剂制备车间和质控实验室；③Contracted香港HKIB的PIC/S GMP标准车间。
同时，满足生产工艺要求的配套仪器设备均已完成设备验证等工作。
本产品aCGT人脐带间充质干细胞注射液生产周期约15天。目前年产量可达2400~3600亿细胞，可供2400~3600人次使用。aCGT正在开发中的封闭式的全自动反应器体系工艺，有望达到单批次“千亿级细胞”的规模产量，实现更低成本更高产量的同时，年产量达到30000亿产量，满足万人次的使用。
7. 临床试验数据 Clinical Data
本项目（方案编号：QS-UCMSC-DLC）的Ib期临床试验已于2023年5月至2025年7月顺利完成。该研究为开放、剂量递增设计，共设置低（1x10^6细胞/kg）、中（2x10^6细胞/kg）、高（4x10^6细胞/kg）三个剂量组，每组6例，共18例受试者已完成100%入组。
阶段性数据显示，该干细胞治疗方案安全性良好，且疗效显著。
安全性：多数不良事件为轻至中度（CTCAE 1-2级），未发生与药物相关的严重不良事件（SAE），提示整体耐受性良好。
有效性：各剂量组均呈现明确疗效趋势，且呈现一定的剂量依赖性。
综合评分改善：高剂量组在改善Child-Pugh评分和MELD评分方面趋势最为显著。
肝功能指标：中、高剂量组的ALT、AST、TBIL呈下降趋势，高剂量组尤为明显；高剂量组的白蛋白（ALB）呈现明显上升趋势。
腹水控制：本产品对顽固性腹水的控制非常显著，其中有1例顽固性腹水患者在接受输注后2年内无需再次抽取腹水。
肝脏硬度：高剂量组受试者的肝脏硬度检测数据显示出一定的改善趋势。
基于Ib期研究的积极结果，本项目已于2025年11月19日顺利获得II期临床试验的组长单位伦理批件，后续将开展II期研究以进一步验证药物的有效性与安全性。
8. 中美欧药监局双申报计划 Plan for China NMPA, US FDA & European EMA Filings
本产品已于2022年12月9日获批中国NMPA的临床试验申请（受理号：CXSL2200457；临床试验通知书编号：2022LP02004）。
9. 专利情况 Patent Information
人脐带间充质干细胞作为自人类存在以来就已存在的与生俱来的原代细胞，本身无专利保护。同时，人脐带间充质干细胞的分离、纯化、生产、质控等基本过程作为长期公开知识也无专利保护。为提高生产效率或质量或疗效等的各公司特有处理技术步骤和方法，各公司可能拥有其专利或保密措施。
目前，aCGT已申请获得“一种适用于脐带间充质干细胞制剂的冻存方法”等授权发明专利3项；“一种冻存袋用冻存架”等授权实用新型专利7项；“一种多层培养瓶结合的细胞培养方法”等公布状态的发明专利12项。同时，aCGT正在申请的“对建立主细胞库的源组织筛选技术和方法”专利等10余项。
专利研究表明，aCGT的“异体人脐带间充质干细胞静脉注射液及其临床应用”不存在潜在知识产权纠纷。